Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell'Umbria e delle Marche
Webzine Sanità Pubblica Veterinaria: Numero 39 Dicembre 2006 [http://www.spvet.it/]
Antibiotic resistance in Salmonellae isolated in the Marche Region (Italy) - Resistenza antibiotica in Salmonelle isolate nella Regione Marche
Staffolani M., Franco A., Owczarek S., Fisichella S.
Summary: Salmonellae are a bacterial cause of food-poisoning worldwide. In this essay, data achieved from the Reference Center for Enthero pathogens in the year 2005 in the italian circuit Enter-vet and Enter-net are discussed. 448 isolated of Salmonella: 246 of human origin for the Enter-net net and 235 of not human origin (environmental, animal and feed) for the Enter-vet net have been analysed.
Particularly the publication refers about a clone of Salmonella resistant to the Cephalosporin and a clone resistant to the fluoroquinolones.
INTRODUZIONE
L’aumento del fenomeno dell’antibioticoresistenza ha indotto la UE (Direttiva 2003/99/CE) ad implementare le raccomandazioni sulla sorveglianza ed il flusso informativo relativo agli agenti zoonotici, già previsto dalla precedente Direttiva 92/117/EEC, considerando l’antibioticoresistenza alla stregua di una zoonosi trasversale.
Salmonella enterica è uno dei più importanti patogeni zoonotici e da alcuni anni il numero di ceppi multiresistenti sta aumentando con frequenza crescente indipendentemente dalla fonte di isolamento (1).
In questo studio sono riportati i dati ottenuti dal Centro di Riferimento delle Marche nell’anno 2005 nell’ambito dei circuiti nazionali Enter-vet ed Enter-net, riportando in particolare l’emergenza di un clone di Salmonella resistente alle Cefalosporine di terza generazione e un clone resistente ai fluorochinoloni.
MATERIALI E METODI
Sono stati analizzati 448 isolati di Salmonella spp. di cui 246 di origine umana per la rete Enter-net e 235 di origine non umana (ambientale, animale ed alimentare) per la rete Enter-vet.
La sierotipizzazione è stata eseguita con sieri del commercio (Biogenetics) secondo lo schema di Kauffman-White (2). I test di sensibilità sono stati eseguiti con la tecnica della diffusione in Agar secondo standard internazionali CLSI (ex-NCCLS) per l’interpretazione degli aloni di inibizione (3). I pannelli di antibiotici impiegati sono quelli previsti dai protocolli delle reti Enter-net ed Enter-vet e vengono di seguito riportati.
Gli isolati di Salmonella spp. di origine umana sono stati saggiati nei confronti di 13 antibiotici (Oxoid) alle seguenti concentrazioni: Ampicillina (A) 10, Cloramfenicolo (C) 30, Streptomicina (S) 10, Sulfonamidi (Su) 300, Tetraciclina (T) 30, Acido nalidixico (Nal) 30, Cefotaxime (Ctx) 30, Ciprofloxacina (Cip) 5, Gentamicina (Gm) 10, Kanamicina (Kan) 30, Amoxicillina-acido clavulanico (Amc) 30, Trimethoprim-Sulfametossazolo (Sxt) 1.25/23.75 e Cefalotina (Kf) 30.
Gli isolati di origine non umana sono stati saggiati in aggiunta con altri 3 antibiotici: Colistina (Cl) 10, Enrofloxacina (Enr) 5 e Ceftazidime (Caz) 30.
Gli isolati di Salmonella provenienti dalla Rete Enter-vet che si sono dimostrati Resistenti o Intermedi nei confronti di Cefotaxime e Ceftazidime e di Enrofloxacina e Ciprofloxacina, sono stati inviati al Centro di Referenza Nazionale per l’Antibioticoresistenza (CRAB).
Presso il CRAB sono stati confermati i test di sensibilià agli antibiotici e gli isolati risultati resistenti o intermedi al Cefotaxime e al Ceftazidime sono stati sottoposti a test di Conferma Fenotipico per ESBL cosi come indicato nel Documento CLSI (ex-NCCLS) M31-A2.
Gli isolati risultati positivi per il test di conferma sono stati poi analizzati tramite PCR per la presenza dei geni blaSHV, blaTEM, blaCTX-M, blaOxa1, blaAmpC (4 e 5).
Gli isolati di Salmonella provenienti dalla rete Enter-net che si sono mostrati resistenti alla Ciprofloxacina sono stati inviati all’Istituto Superiore di Sanità per la conferma, dove è stata anche eseguita la PFGE (6).
RISULTATI ENTER-NET
I risultati sono presentati nella figura 1.
Tra i ceppi di origine umana si segnalano 2 stipiti resistenti alla Ciprofloxacina appartenenti al non comune sierotipo Kentucky. Entrambi i ceppi sono stati isolati presso l’ospedale di Fano, il primo alla fine di marzo da una bambina di 7 mesi affetta da gastroenterite e il secondo alla fine di aprile dalla madre di 31 anni affetta da sintomi diarroici. I risultati dell’antibiogramma hanno mostrato la presenza di resistenza ad Ampicillina, Acido Nalidixico, e Cefalotina oltre che alla Ciprofloxacina. In seguito all’invio dei ceppi presso l’ISS, dopo la conferma della resistenza alla Ciprofloxacina, è stata eseguita una elettroforesi in campo pulsato con XbaI constatando l’identità del profilo (figura 3). Inoltre, vista la rarità del riscontro di ceppi di Salmonella resistenti ai fluorochinoloni, è stato lanciato un messaggio di allerta ai Centri di Riferimento Regionali per aumentare l’attenzione nei confronti del sierotipo Kentucky.
Si segnala che recentemente alcuni autori hanno riscontrato una correlazione tra la presenza di S. Kentucky resistente alla Ciprofloxacina e viaggi in Africa settentrionale ed orientale (7). Dai dati anamnestici raccolti in occasione dell’episodio sopra descritto non risutavano viaggi effettuati all’estero nei mesi precedenti l’esordio dell’infezione.
Figura 1. Resistenza (%) in Salmonella spp.. di origine umana tipizzati presso IZSUM 2005 (N=246)
(rete Enter-net).
RISULTATI ENTER-VET
I risultati sono illustrati nella figura 2.
Tra i ceppi di origine non umana si segnala la presenza di 5 stipiti di Salmonella resistenti al Cefotaxime. Si tratta di 4 ceppi di S. Livingstone (isolati da tamponi ambientali) che hanno manifestato resistenza anche nei confronti di Ampicillina, Acido Nalidixico, Gentamicina, Cefalotina, Streptomicina e Sulfonamidi e di un ceppo di S. Infantis (proveniente da carne fresca di pollo) resistente anche a Streptomicina, Sulfonamidi, Tetraciclina, Acido Nalidixico ed Enrofloxacina. Tutti i ceppi resistenti al Cefotaxime provenivano dalla stessa azienda avicola con annesso stabilimento di lavorazione e sono stati isolati nello stesso periodo (febbraio 2005) in occasione di controlli volti ad indagare sulle cause di un improvviso calo dell’indice di conversione nei polli. Tali controlli hanno permesso di accertare che il calo ponderale è stato causato da un’ infezione da S. Enteritidis circoscritta mediante l’uso di Enrofloxacina.
Inviati presso il CRAB, solo gli stipiti di S. Livingstone sono risultati positivi alla reazione di PCR con i primers specifici per il gene SHV.
Figura 2. Resistenza (%) in Salmonella spp.. isolati da alimenti, animali ed ambiente, tipizzati presso IZSUM 2005 (N=235) (rete Enter-vet).
Figura 3. PFGE dei due isolati di S. Kentucky resistenti alla Ciprofloxacina. Lane 51529: isolato di origine umana del 2004 non resistente; lane 56808 e 57002: isolati del 2005 resistenti alla Ciprofloxacina.
BIBLIOGRAFIA
1. Rabsch W et al. Microbes infect 2001; 3: 237-247.
2. Popoff MY 2001. Antigenic formulas of Salmonella serovarS. WHO collaboratine Centre for Reference Research on Salmonella. Institut Pasteur, Paris.
3. CLSI (ex NCCLS) Documents M-31 A2 Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated from Animals; Approved Standard.
4. Carattoli A., Lovari S., Franco A., Cordaro G., Di Matteo P. and Battisti A. “Extended-Spectrum ß-Lactamases in Escherichia coli Isolated from Dogs and Cats in Rome, Italy, from 2001 to 2003.” Antimicrobial Agents And Chemotherapy, Feb. 2005, p. 833–835 Vol. 49, No. 2.
5. Karmele Colom , Javier Perez , Rodrigo Alonso, Agueda Fernandez-Aranguiz ,
Eva Larino , Ramo.n Cisterna “Simple and reliable multiplex PCR assay for detection of blaTEM, blaSHV and blaOXA_1 genes in Enterobacteriaceae” FEMS Microbiology Letters 223 (2003) 147-151.
6. Peters TM et al. 2003 The Salm-gene project-a European collaboration for DNA fingerprinting for. Euro Surveill 8,46-50.
7. Weill FX et al. Ciprofloxacin-resistant Salmonella Kentucky in travellers. Emerging Infectious Diseases; vol 12 N° 10 October 2006.
